Elektroforesis Gel Poliakrilamida Dapat Mendeteksi Kontaminan

Read Also

Penilaian homogeneitas protein paling baik dilakukan dengan elektroforesis  gel poliakrilamida (PAGE, polyacrylida gel electrophoresis) di bawah berbagai kondisi. Yang paling popular di antaranya adalah elektroforesis gel poliakrilamida atau PAGE dengan sodium dodesil sulfat (SDS), suatu detergen ion yang memisahkan protein multimerik menjadi protomer. Karena setiap ikatan peptida mengikat kurang lebih dua buah molekul SDS, polipeptida tersebut memiliki muatan negatif yang kuat. Dengan demikian, jarak yang ditempuh setiap polipeptida ketika bermigrasi kearah anoda bergantung pada massa molecular relatifnya (Mr). Sebagai alternatif lain, PAGE dapat dilaksanakan dalam kondisi asli yaitu, tanpa adanya SDS atau denaturan lain sehingga struktur kuaterner dan kerap kali pula aktivitas katalitik enzimnya dapat dipertahankan. Dalam PAGE dua dimensi (O’Farrell), dimensi pertama memisahkan protein yang terdenaturasi berdasarkan nilai pl-nya dengan melakukan ekuilibrasi protein tersebut di dalam medan listrik yang mengandung urea dan dengan gradien pH yang dipertahankan oleh amfolit terpolimerisasi. Setelah pemrosesan dengan SDS selesai, dimensi kedua kemudian memisahkan protein berdasarkan ukuran molecular unit protomernya.