Inactivated Emulsion Vaksin Terhadap Penyakit Mulut dan Kuku Tipe a, o, Asia-1

Read Also

Masalah pencegahan penyakit mulut dan kuku pada hewan dan pengurangan kerusakan ekonomi dari kejadian dan penyebarannya, yang dapat menyebabkan situasi darurat di peternakan dengan konsekuensi sosial ekonomi yang parah, relevan untuk banyak negara di dunia, termasuk Federasi Rusia.

Penyakit mulut dan kuku merupakan masalah di seluruh dunia, karena merupakan penyakit yang sangat menular dan menyebar dengan cepat, yang rentan terhadap hewan pertanian utama: sapi (sapi), babi, sapi kecil (sapi), dan banyak hewan liar, secara total lebih dari 100 spesies. Ada 7 jenis virus yang berbeda; vaksinasi terhadap satu jenis tidak melindungi terhadap jenis lain dari penyakit mulut dan kuku.

Untuk vaksinasi profilaksis, vaksin sorbed dan emulsi tradisional mono dan polivalen yang dibuat dari virus kultur yang ditumbuhkan dalam suspensi BHK-21 yang diinaktivasi oleh aminoethylethyleneimine telah menemukan aplikasi praktis.

Meskipun telah dilakukan tindakan, situasi epizootic penyakit mulut dan kuku di dunia, termasuk di Asia, tidak membaik pada tahun 2013. Sejak awal tahun 2013 dan selanjutnya di China, wabah penyakit mulut dan kuku pada sapi dan babi disebabkan oleh jenis Virus O dan A tercatat di beberapa provinsi di China. Pada tahun 2013, tercatat 4 KLB penyakit mulut dan kuku di 4 wilayah Wilayah Trans Baikal dengan Tiongkok. Menurut OIE World Reference Laboratory for foot and mouth disease, diisolasi di Trans-Baikal Territory dan Amur Region Federasi Rusia, Kazakhstan dan Mongolia, isolat 99% identik dengan isolat A / QHXN-CHA-2013-B dan A / GDMM-CHA-2013S. Pada tahun 2013, penyakit mulut dan kuku pada sapi tercatat di Kaukasus Utara dan di Wilayah Krasnodar. Isolat yang diisolasi tersebut termasuk ke dalam galur genetik A/Iran/2005. Isolat galur genetik ini pada tahun 2013 menyebabkan wabah penyakit mulut dan kuku di Timur Tengah.

Perlu dicatat bahwa semua isolat yang diisolasi berbeda dalam antigenisitas dari strain virus PMK tipe A, yang digunakan hingga saat ini untuk pembuatan vaksin PMK.

Karena vaksinasi hewan yang sistematis dan kontrol latar belakang kekebalan ternak, sebagian besar entitas konstituen Federasi Rusia, termasuk Kaukasus Utara, telah lama berhasil dalam penyakit kaki dan mulut. Namun, situasi epizootik yang tidak menguntungkan di PMK di dunia dan kemungkinan nyata untuk memasukkan patogen ke wilayah Rusia mendikte perlunya memperkuat tindakan anti-PMK, di antaranya yang utama adalah penerapan vaksinasi universal preventif hewan di wilayah risiko tinggi terjadinya dan penyebaran penyakit mulut dan kuku.

Hasil penelitian yang dipublikasikan menunjukkan manfaat dari sediaan emulsi, yang dibuat menggunakan bahan pembantu minyak.

Sediaan emulsi diperoleh dengan mencampur dua fase yang saling tidak larut: minyak (minyak adjuvant) dan air, yang mengandung antigen (antigen) dalam media pendukung, dengan pencampuran kuat (emulsifikasi).

Pada saat yang sama, tergantung pada komposisi bahan pembantu minyak, emulsi dari berbagai jenis diperoleh: "air dalam minyak" (terbalik), "minyak dalam air" (langsung) atau "air-minyak-air" (multiple). Jenis emulsi terbalik paling sering digunakan untuk mengimunisasi hewan ternak.

Teknologi pembuatan vaksin PMK dari virus yang tidak aktif dimulai dengan pemilihan galur produksi berdasarkan analisis epizootologis terhadap dinamika penyakit mulut dan kuku di dalam negeri dan negara tetangga. Saat membuat obat untuk profilaksis spesifik, jenis virus penyakit mulut dan kuku yang sesuai digunakan dan strain dengan spektrum antigenik yang luas di dalam jenis dengan imunogenisitas silang yang jelas dipilih. Strain dengan kisaran imunogenisitas yang luas dan memenuhi persyaratan wilayah dipilih dengan mengujinya dalam reaksi proteksi silang atau lebih sering dalam reaksi netralisasi silang. Sebagai aturan, populasi virus digunakan sebagai galur produksi, yang, bersama dengan sistem dan kondisi budidaya industri, memastikan akumulasi komponen virus 146S dan 75S yang terjamin dan tinggi serta produksi vaksin imunogenik.

Selain itu, strain produksi diperlukan untuk menjaga stabilitas virus selama pemurnian dari komponen jaringan dan konsentrasi, serta pelestarian virus selama inaktivasi dan penyimpanan jangka Panjang.

Agen penyebab penyakit mulut dan kuku memiliki variabilitas antigenik yang signifikan dari strain dalam serotipe yang sama, yang terdeteksi pada interval waktu yang berbeda dan di wilayah yang berbeda dan tergantung pada komposisi spesies dari populasi yang rentan, status kekebalannya dan berbagai faktor lainnya.

Variabilitas antigenik virus penyakit mulut dan kuku disebabkan oleh substitusi asam amino pada fragmen polipeptida (epitop antigenik) yang terpapar pada permukaan protein kapsid. Pergeseran spektrum antigenik yang sesuai dengan pembaruan struktur strain medan baru dapat bervariasi dari yang tidak signifikan yang ditangkap oleh antibodi monoklonal hingga yang signifikan yang direkam menggunakan imunoglobulin poliklonal tradisional. Perubahan signifikan dalam karakteristik antigenik dari galur alami mengarah pada fakta bahwa vaksinasi hewan dengan galur vaksin produksi tidak menjamin perlindungan populasi dari galur epizootik yang berbeda secara antigen dari penyakit kaki dan mulut.

Ilmuwan asing menunjukkan bahwa campuran dua vaksin menyebabkan perlindungan pada babi guinea terhadap strain heterolog, sementara masing-masing secara terpisah tidak memberikan respon imun terhadap strain heterolog penyakit kaki dan mulut.

Ilmuwan domestik melakukan penelitian yang membandingkan aktivitas imunogenik dari vaksin mono dan multi strain. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa pengenalan ke dalam vaksin strain virus lain yang berbeda secara antigen dari jenis ini mengarah pada perluasan spektrum aksi antigenik, sehingga meningkatkan aktivitas imunogenik dari vaksin multi-strain terhadap homo dan heterolog. strain virus jenis ini dan tidak menurunkan aktivitas terhadap produksi.

Pengembangan alat diagnostik baru dan imunoprofilaksis spesifik penyakit mulut dan kuku adalah tugas yang mendesak.

Vaksin emulsi inaktif trivalen yang dikenal terhadap virus PMK tipe A, O dan Asia-1 RAKSHA OVAC TRIVALENT diproduksi oleh Indian Immunologicals Limited Rakshapuram, Gachibowli Hyderebad, India.

Dikenal vaksin inaktif "Decivac FMD DOE" (Decivak) terhadap penyakit mulut dan kuku pada sapi, kerbau, babi, domba dan kambing "MSD Animal Health (Intervet International GmbH", Jerman.

Dikenal vaksin tidak aktif dimurnikan terhadap penyakit kaki dan mulut ruminansia dan babi "Aftopor" (Autopore) trivalen (tipe A, O, Asia-1) Perusahaan "Merial Animal Health Ltd", Prancis.

Dikenal vaksin FUTVAC (Vaksin Penyakit Kaki dan Mulut, Inactivated, tipe O, A, Asia-1) Brilliant Bio Pharma Limited, Hyderabad)), India.

Vaksin yang dikenal untuk melawan penyakit mulut dan kuku kultur emulsi "ARRIACH-VAC" trivalen.

Kerugian utama dari vaksin yang diketahui adalah efisiensinya yang rendah karena perbedaan antigenik yang ada antara strain dari jenis virus penyakit kaki dan mulut yang sama, serta kemurnian bahan antigenik yang tidak mencukupi.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan vaksin yang tidak aktif emulsi tipe A, O, Asia-1, yang memiliki aktivitas imunogenik tinggi dengan spektrum antigenisitas yang luas ketika divaksinasi terhadap strain epizootik penyakit mulut dan kuku yang berbeda.

Tujuan tercapai bahwa untuk pencegahan dan pengendalian penyakit, diperoleh vaksin emulsi yang tidak aktif terhadap penyakit mulut dan kuku tipe A, O, Asia-1 dengan antigen bishtamm virus penyakit mulut dan kuku tipe A, yang menciptakan perlindungan yang efektif. hewan yang rentan dari infeksi virus penyakit mulut dan kuku tipe A, O, Asia-1 dan memiliki efek antigenik yang diperluas terhadap virus PMK tipe A.

Hasil teknis dari penggunaan penelitian ini adalah untuk meningkatkan aktivitas imunogenik dari vaksin emulsi yang tidak aktif terhadap penyakit mulut dan kuku tipe A, O, Asia-1, dengan memperluas spektrum aksi antigenik dengan valensi A.

Hasil teknis yang ditentukan dicapai dengan membuat vaksin emulsi yang tidak aktif terhadap penyakit mulut dan kuku tipe A, O dan Asia-1 dengan antigen bishtamm tipe A, yang dicirikan oleh serangkaian fitur berikut.

Usulan vaksin dalam 1 cm 3 sediaan sebagai zat aktif mengandung campuran bahan avirulen dan purified dari strain virus penyakit mulut dan kuku: antigen virus PMK tipe A bishtamm berupa bahan avirulen dan purified dari virus penyakit mulut dan kuku galur A No. 2187 / Kuti / 2013 dan A No. 2171 / Kabardino-Balkarian / 2013, bahan avirulen dan murni dari virus penyakit mulut dan kuku galur No. 2123 / Ossetia Selatan / 2011 dan bahan avirulen dan murni dari a virus penyakit mulut dan kuku Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89 - lebih disukai diperoleh dalam kultur sel yang ditransplantasikan BHK-21 dalam jumlah x tidak kurang dari 3 g, memberikan aktivitas antigenik dalam tubuh hewan ketika obat target diberikan padanya dan aditif target: media pendukung dan bahan pembantu minyak - dalam jumlah yang memberikan presentasi antigen yang toleran dalam tubuh hewan yang diimunisasi. Kandungan aditif target dalam produk jadi dihitung dengan mempertimbangkan volume dosis vaksin yang divaksinasi untuk setiap spesies hewan.

Sumber virus untuk memperoleh strain virus penyakit mulut dan kuku A No. 2187/Kuti/2013 diisolasi pada tahun 2013 di Rusia. Strain diperoleh dengan bagian berulang yang berurutan pada kultur sel hetero dan homolog yang sensitif. Strain disesuaikan dengan sel ginjal babi trypsinized primer dan kultur sel BHK-21, IBRS-2 dan PSGK-30 yang dapat ditransplantasikan.

Sumber virus untuk mendapatkan strain Dan No. 2171 / Kabardino-Balkarsky / 2013 dialokasikan pada Juli 2013 di desa Nizhny Kurkuzhin, distrik Baksan, Republik Kabardino-Balkarian. Strain diperoleh dengan bagian berulang yang berurutan pada kultur sel hetero dan homolog yang sensitif. Strain disesuaikan dengan sel ginjal babi trypsinized primer dan kultur sel BHK-21, IBRS-2 dan PSGK-30 yang dapat ditransplantasikan.

Strain virus penyakit mulut dan kuku Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89 diperoleh dari Pirbright World Reference Laboratory.

Virus asli untuk mendapatkan strain virus penyakit mulut dan kuku No. 2123 / Ossetia Selatan / 2011 diisolasi dari babi pada tahun 2011 di desa Styrfas, distrik Dzau Republik Ossetia Selatan. Strain diperoleh dengan bagian berulang yang berurutan pada kultur sel hetero dan homolog yang sensitif. Strain disesuaikan dengan sel ginjal babi trypsinized primer dan kultur sel BHK-21, IBRS-2 dan PSGK-30 yang dapat ditransplantasikan.

Untuk pembuatan vaksin, kultur suspensi sel BHK-21 lebih disukai digunakan sebagai sistem biologis yang sensitif, dan Serum tanpa serum yang dilengkapi dengan hidrolisat otot kering enzimatik (FSMS), hidrolisat protein darah kering (GBKS) dan antibiotik pada pH 7,4 digunakan sebagai sistem biologis yang sensitif. -7.6.

Untuk menonaktifkan virus, AEEI digunakan, yang ditambahkan ke suspensi yang mengandung virus dengan konsentrasi 0,025-0,05%. Pada akhir inaktivasi, AEEI dinetralkan dengan menambahkan natrium tiosulfat ke dalam suspensi.

Antigen yang dihasilkan dimurnikan dari pengotor pemberat menggunakan poliheksametilen guanidin hidroklorida (PHMG), yang dimasukkan ke dalam suspensi dengan konsentrasi 0,005-0,007%.

Bahan antigenik avirulent dan murni dari galur: A No. 2187 / Kuti / 2013, A No. 2171 / Kabardino-Balkian / 2013,

Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89 dan O No. 2123 / South Ossetia / 2011, adalah suspensi yang sebagian besar mengandung komponen imunogenik 146S dan 75S dari virus penyakit mulut dan kuku.

Kandungan kuantitatif dan kualitatif bahan baku virus ditentukan dengan turbidimetri.

Untuk pembuatan vaksin, digunakan bahan virus yang mengandung setidaknya 0,5 g komponen imunogenik 146S dan 75S virus penyakit mulut dan kuku dalam 1 cm³.

Konsentrasi yang diperlukan dari komponen imunogenik 146S dan 75S dari virus penyakit mulut dan kuku dalam sediaan vaksin disediakan oleh konsentrasi antigen melalui ultrafiltrasi aliran.

Vaksin emulsi diperoleh dengan mendispersikan di pabrik koloid konsentrat antigen penyakit mulut dan kuku dan bahan pembantu minyak dalam perbandingan 3: 7 dan 1:1 berat, masing-masing. Untuk meningkatkan respon imun, adjuvant berbasis minyak yang diproduksi oleh Seppic Montanide ISA-70 atau Montanide ISA-206 lebih disukai digunakan.

Kandungan antigen dan media pendukung dengan adjuvant minyak dalam dosis vaksin vaksin untuk setiap hewan dalam perbandingan 3: 7 dan 1: 1 adalah optimal, karena memberikan presentasi antigen yang toleran dalam tubuh hewan yang diimunisasi.