Viral Transport Media (VTM) - Prinsip, Persiapan, Penggunaan, Keterbatasan
Definisi Viral Transport Media (VTM)
Viral transport media (VTM) adalah zat nutrisi yang
digunakan untuk membawa dan mempertahankan viabilitas spesimen (virus) ke
laboratorium untuk identifikasi dan pemrosesan sampel lebih lanjut.
- Media transportasi untuk virus sangat penting karena mereka lebih labil daripada agen infeksi lainnya.
- Probabilitas keberhasilan isolasi meningkat bila interval waktu antara pengumpulan dan inokulasi biakan lebih sedikit dan bila spesimen mengandung partikel virus sebanyak mungkin.
- Untuk memaksimalkan jumlah virus dalam spesimen, pengambilan sampel harus dilakukan sejak awal penyakit pasien.
- Isolasi virus yang berhasil dan andal dapat dicapai bila media transportasi yang sesuai digunakan.
- Jumlah isolasi juga meningkat ketika spesimen virus dikirim ke laboratorium lokal atau laboratorium rujukan.
Prinsip Viral Transport Media (VTM)
- Agen virus sangat bervariasi dalam komposisi, stabilitas, struktur, morfologi, dan ukuran. Virus berselubung longgar yang diperoleh dari sampel manusia umumnya lebih labil daripada virus padat yang tidak berselubung.
- Karena mereka labil terhadap kondisi lingkungan, kelangsungan hidup virus ini harus dilindungi dengan menggunakan solusi yang berbeda.
- Beberapa virus yang diselimuti, seperti herpes simplex viruses (HSV), secara mengejutkan stabil dalam keadaan tidak beku ketika ditempatkan di lingkungan penyimpanan yang sesuai. Namun, sebagian besar virus memang membutuhkan suhu yang lebih dingin.
- Infektivitas virus menurun dari waktu ke waktu, dan umumnya, tingkat peluruhan adalah fungsi dari suhu, sehingga stabilitas ditingkatkan dengan pendinginan.
- Dengan demikian, media transpor virus disiapkan dengan gagasan menyediakan kondisi suhu, pH, dan nutrisi yang sesuai.
- Konstituen dari media transpor virus yang sesuai dipilih untuk membuat larutan isotonik yang mengandung protein untuk melindungi struktur virus, antibiotik untuk mengontrol kontaminasi mikroba, dan satu atau lebih buffer untuk mengontrol pH.
- Media transpor virus disiapkan dengan gagasan untuk mempertahankan kelangsungan hidup kultur virus atau spesimen untuk tes seperti nucleic acid amplification test NAAT) sambil mencegah pengeringan sampel.
Komposisi Viral Transport Media (VTM)
Media transpor virus yang ideal akan memiliki banyak
karakteristik berikut;
- Itu akan mempertahankan aktivitas virus, bahkan pada suhu kamar.
- Ini akan menjadi tidak beracun untuk kultur sel dan tidak mengaburkan munculnya efek sitopatik virus.
- Itu akan memiliki umur simpan yang lama (baik dalam keadaan beku atau tidak beku).
- Ini akan berlaku untuk isolasi kultur dan tes langsung seperti enzim immunoassays atau imunofluoresensi.
- Untuk mencapai semua karakteristik tersebut di atas, media transpor virus biasanya memiliki komponen protein pelindung, agen antimikroba untuk mencegah kemungkinan kontaminasi, dan buffer untuk menjaga pH larutan.
- Beberapa VTM juga memiliki ion dan mineral tambahan yang membantu menjaga kelangsungan hidup spesimen tersebut.
Persiapan Viral Transport Media (VTM)
- Sejumlah media transportasi virus tersedia secara komersial, yang dapat langsung dibeli dan digunakan dengan syarat-syarat yang disebutkan.
- Beberapa media tersebut antara lain COPAN Universal Transport Media dan Eagle Minimum Essential Medium (E-MEM).
- Namun, beberapa media lain dapat disiapkan secara lokal dengan tetap mempertahankan kondisi dan komposisi yang sesuai.
- Komposisi dan persiapan transpor virus yang berbeda berbeda tergantung pada apakah sampel diambil dari manusia atau hewan lain.
Untuk spesimen dari manusia:
Berikut ini adalah cara pembuatan VTM buatan lokal untuk
swab hidung dan tenggorokan dari manusia:
- Tambahkan 10g veal infusion broth dan 2g bovine albumin fraction V ke dalam distilled water steril (sampai 400 ml).
- Tambahkan 0,8 ml larutan gentamisin sulfat (50 mg/ml) dan 3,2 ml amfoterisin B (250 g/ml) –
- Sterilisasi dengan penyaringan.
Berikut ini adalah prosedur yang lebih rumit untuk persiapan
volume VTM yang lebih besar untuk manusia:
- Nonaktifkan 500mL fetal bovine serum (FBS) dengan memanaskan selama 30 menit dalam penangas air pada 56,0°C +/- 1,0°C. Gunakan FBS yang tidak aktif secara komersial jika tersedia.
- Tambahkan 50mL amfoterisin B, tambahkan 50mL gentamisin ke FBS yang tidak aktif dan kemudian saring sterilkan larutan melalui unit filter 0,20 hingga 0,45 m (unit filter 150mL).
- Tambahkan 10mL FBS ke 500mL Hanks Balanced Salt Solution (HBSS).
- Tambahkan 2 mL campuran Gentamisin/Amfoterisin B ke dalam HBSS yang telah dibentuk sebelumnya dengan FBS.
- Disperse solusi ke botol dan ca botol. Campur dengan membalik botol.
- Beri label botol bersama dengan tanggal produksi, aditif, dan tanggal kedaluwarsa.
- Aliquot 3mL media ke dalam tabung tertutup ulir berbentuk kerucut steril (seperti tabung 16x100mm). Tutup rapat-rapat setelah media dikeluarkan. Beri label wadah dengan informasi yang diperlukan.
- Simpan pada 2-8°C.
Untuk spesimen dari hewan:
- Untuk pengumpulan dan pengangkutan spesimen pada hewan, dua jenis VTM dapat digunakan.
- Media transportasi 199 banyak digunakan untuk pengumpulan dan pengangkutan spesimen klinis dari semua spesies.
- Media kedua, media transpor PBS-Gliserol, yang merupakan media berbasis gliserol, memberikan stabilitas spesimen jangka panjang di mana pendinginan tidak segera mungkin dilakukan.
- Sangat cocok untuk inokulasi telur tetapi tidak cocok untuk inokulasi kultur jaringan.
Persiapan Media Transportasi 199
- Ambil media kultur jaringan 199, yang mengandung 0,5% bovine serum albumin (BSA).
- Untuk 1 liter di atas tambahkan: benzilpenisilin (2 x 106 IU/liter), streptomisin (200 mg/liter), polimiksin B (2 x 106 IU/liter), gentamisin (250 mg/liter), nistatin (0,5 x 106 IU /liter), ofloksasin hidroklorida (60 mg/liter), dan sulfametoksazol (0,2 g/liter).
- Sterilkan dengan penyaringan dan distribusikan dalam volume 1,0–2,0 ml dalam tabung berpenutup ulir.
Persiapan media transportasi PBS-Gliserol
- Siapkan larutan garam penyangga fosfat dengan menambahkan 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, dan 0,24 g KH2PO4. Tambahkan air suling ke campuran ini untuk membuat 1 liter.
- Autoklaf campuran yang sudah disiapkan dan campurkan 1:1 dengan gliserol steril untuk membuat 1 liter.
- Untuk 1 liter di atas tambahkan: benzilpenisilin (2 x 106 IU/liter), streptomisin (200 mg/liter), polimiksin B (2 x 106 IU/liter), gentamisin (250 mg/liter), nistatin (0,5 x 106 IU /liter), ofloksasin hidroklorida (60 mg/liter), dan sulfametoksazol (0,2 g/liter).
- Tuangkan 1,0–2,0 ml media transportasi ke dalam botol plastik tutup ulir steril.
- Simpan vial ini pada -20 °C sampai digunakan atau pada suhu kamar selama 1-2 hari.
Penggunaan Viral Transport Media (VTM)
- Media transport virus digunakan untuk pengumpulan dan pengangkutan spesimen yang mengandung virus.
- Ini juga digunakan untuk menjaga kelangsungan hidup organisme lain seperti mikoplasma, klamidia, dan ureaplasma.
- VTM juga membantu memaksimalkan jumlah partikel virus dalam sampel.
- Media transportasi cair digunakan terutama untuk mengangkut swab atau bahan yang dilepaskan ke media dari koleksi swab.
- Ini memfasilitasi pengumpulan dan pengangkutan sampel di area di mana fasilitas pendingin tidak tersedia.
Keterbatasan Viral Transport Media (VTM)
- Beberapa pertumbuhan kontaminan mungkin diamati selama periode transportasi yang panjang.
- Setelah transportasi, spesimen harus diinokulasi dalam media yang tepat sesegera mungkin. Untuk hasil yang optimal, selang waktu antara pengumpulan sampel dan inokulum ke dalam media kultur harus dikurangi seminimal mungkin.
- Beberapa virus mungkin lebih labil daripada yang lain, dan VTM mungkin sama efektifnya.
- Beberapa antibiotik dan bahan kimia yang digunakan dalam VTM dapat mengubah pH larutan, yang mempengaruhi kelangsungan hidup organisme.
No comments